細胞輔助試劑在細胞培養、流式細胞術等實驗中發揮關鍵作用。
細胞輔助試劑常見種類及其功能如下:
一、細胞培養輔助試劑
培養基
功能:提供細胞生長所需的基礎營養物質(如氨基酸、維生素、無機鹽)和生長因子。
類型:DMEM、RPMI-1640、MEM等,根據細胞類型選擇不同配方。
補充物:胎牛血清(FBS)、人血清、抗生素(如青霉素-鏈霉素)、谷氨酰胺等,增強細胞生長穩定性。
細胞解離試劑
胰蛋白酶:分解細胞間蛋白質,使貼壁細胞脫落,用于傳代培養。
EDTA:螯合鈣、鎂離子,抑制胰蛋白酶活性,常與胰蛋白酶聯合使用(如0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA)。
膠原酶:用于消化組織塊,釋放單個細胞。
細胞凍存試劑
凍存液:含DMSO(二甲基亞砜)和血清,保護細胞在低溫下免受冰晶損傷。
程序降溫盒:控制凍存速度,提高細胞復蘇存活率。
細胞附著因子
多聚賴氨酸、層粘連蛋白、纖維連接蛋白:涂覆培養皿表面,促進細胞附著和鋪展,尤其適用于難貼壁細胞。
抗生素與抗污染試劑
青霉素-鏈霉素:防止細菌污染。
支原體祛除試劑:定期使用可預防支原體污染,維持細胞健康。
二、流式細胞術輔助試劑
紅細胞裂解液(溶血劑)
功能:利用低滲原理裂解血液或骨髓樣本中的紅細胞,富集白細胞。
特點:溫和裂解,保護白細胞膜完整性,減少碎片產生。
流式染色緩沖液
功能:稀釋抗體、洗滌細胞,維持細胞活力并減少非特異性結合。
成分:含BSA(牛血清白蛋白)和疊氮鈉,提供等滲環境。
固定劑與破膜劑
固定劑:如4%多聚甲醛,固定細胞形態,穩定表面抗原。
破膜劑:使抗體進入胞內檢測細胞因子或核內抗原(如轉錄因子)。
組合產品:溶血、破膜、染色一步完成,簡化操作流程。
細胞死活染料
膜不可透過性染料:如7-AAD、PI,僅進入死細胞,用于排除死細胞干擾。
可固定染料:如Zombie™系列,兼容固定和破膜步驟,提供更多熒光通道選擇。
Fc受體封閉劑
功能:阻斷免疫細胞(如B細胞、巨噬細胞)表面的Fc受體,減少非特異性抗體結合。
類型:抗小鼠CD16/CD32抗體、Human TruStain FcX™等。
細胞刺激劑與阻斷劑
刺激劑:如PMA(佛波酯)+離子霉素,激活細胞內信號通路,促進細胞因子分泌。
阻斷劑:如Brefeldin A(BFA)、莫能霉素,抑制高爾基體功能,阻斷細胞因子分泌,使其在胞內積累。